PCR實驗室設計基本配置及要求
一、PCR實驗室設計基本配置
1.主體結(jié)構(gòu):
主體為彩鋼板、鋁合金型材。室內(nèi)所有陰角、陽角均采用鋁合金50內(nèi)圓角鋁,從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問題。結(jié)構(gòu)牢固,線條簡明,美觀大方,密封性好。
2.標準的三區(qū)分隔和氣壓調(diào)節(jié):
將PCR過程分成試劑準備、標本制備和PCR擴增檢測三個獨立的實驗區(qū)。整個區(qū)域有一個整體緩沖走廊。每個獨立實驗區(qū)設置有緩沖區(qū),同時各區(qū)通過氣壓調(diào)節(jié),使整個PCR實驗過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染并降低擴增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染。
可打開緩沖區(qū)Ⅰ,緩沖區(qū)Ⅱ和 PCR 擴增區(qū)的排風扇往外排氣,在實驗區(qū)的外墻上和各扇門上都安裝有風量可調(diào)的回風口,空氣通過回風口向室內(nèi)換氣。
3.機械連鎖不銹鋼傳遞窗:
試劑和標本通過機械連鎖不銹鋼(不建議使用電子連鎖方式)傳遞窗傳遞,保證試劑和標本在傳遞過程中不受污染(人物分流)。
4.消毒:
在三個實驗區(qū)和三個緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內(nèi)部安裝有紫外燈,供消毒用。
在試劑準備區(qū)和標本制備區(qū) 還設置移動紫外線燈,對實驗桌進行局部消毒。
5.照明
燈具要選用凈化燈具,能達到便于清洗、不積塵的特點。
標準的PCR實驗室建設的過程中應注意:
①嚴格按照規(guī)范科學設計的安裝流程。
②規(guī)范的安裝流程和全面的服務流程。
③安裝前需要確定以下安裝條件,如:電源電壓,電源進線位置,電話網(wǎng)絡線進線位置,進水水壓,最小安裝空間,地面平整度,通風孔、進水管和下水管的位置等,理想狀態(tài)的空間尺寸和通風口尺寸。
6.地面
地面建議使用PVC卷材地面或自流坪地面,整體性好。便于進行清掃,耐腐蝕。沒有條件的也可采用水磨石地面,或大塊的瓷磚(至少800mm×800mm)接縫需要小于2mm。
二、PCR 實驗室設計基本要求
1.標準的PCR實驗室產(chǎn)物分析區(qū)或三個區(qū)域的最后一個區(qū)域(即擴增及產(chǎn)物分析區(qū)),空氣流向應由室外向室內(nèi),可通過在室內(nèi)設置通風櫥、排風扇或其他排風系統(tǒng)達到空氣流由室外向室內(nèi)流動的要求。
2.PCR 實驗室依據(jù)所使用的方法可分為試劑準備、標本制備、擴增、產(chǎn)物分析等三或四個區(qū)域。只是使用實時熒光PCR儀、HIV病毒載量測定儀的PCR實驗室,有上述前面三個區(qū)域即可。各區(qū)域應完全獨立分隔,不應有任何的空氣直通。
3.PCR實驗室各區(qū)域儀器設備配備通常如下:
①標準的PCR實驗室標本制備區(qū)
儀器設備主要應有生物安全柜(最好為B2, 可避免提取核酸在柜內(nèi)反復循環(huán),造成標本間交叉“污染”,出現(xiàn)假陽性結(jié)果。此外還應配備加樣器、臺式高速離心機(冷凍及常溫)、臺式低速離心機、恒溫設備(水浴和/或干浴儀)、冰箱、混勻器和可移動紫外燈等。
②標準的PCR實驗室試劑準備區(qū):
儀器設備主要應有加樣器、冰箱、天平、低速離心機、混勻器、可移動紫外燈等。可使用超凈工作臺作為試劑配制操作臺面。
③標準的PCR實驗室產(chǎn)物分析區(qū):
本區(qū)所使用的儀器設備可能有加樣器、電泳儀(槽)、電轉(zhuǎn)印儀、雜交爐或雜交箱、水浴箱、DNA測序儀、酶標儀和洗板機等。
在理想情況下,PCR實驗室試劑準備、標本制備、擴增三個區(qū)域可設置緩沖間。在緩沖間內(nèi),可設置正壓,使室內(nèi)空氣不流向室外,室外空氣不流向室內(nèi)。
④標準的PCR實驗室擴增區(qū)
主要儀器就是核酸擴增熱循環(huán)儀(PCR儀,實時熒光或普通的)。熱循環(huán)儀的電源應專用,并配備一個穩(wěn)壓電源或UPS,以防止由于電壓的波動對擴增測定的影響。此外,根據(jù)工作需要,還可配備加樣器、超凈臺等。